抗体标记是临床和研究实验的宝贵工具,使科学家能够检测和可视化特定抗原在生物样品(如细胞、组织或蛋白质)中的位置。它通常与免疫测定结合使用,并且根据研究需要可以标记一抗和二抗。
抗体标记时的主要考虑因素是保留抗体的活性。一般来说,与单克隆抗体 (mAb) 相比,多克隆抗体 (pAb) 表现出更大的通用性和抗活性损失的抵抗力,但在标记抗体时始终需要小心,以确保产生高质量的偶联物。当在同一免疫球蛋白上掺入多个标签时尤其如此。1
有各种类型的标签,包括酶、荧光团、生物素、彩色乳胶珠、金纳米颗粒和金属标签。标记或交联生物分子的抗体上最受欢迎的位点是在抗体外表面发现的带电氨基酸。标记抗体有四个主要靶点,另外三个是碳水化合物部分、半胱氨酸残基上的巯基和酪氨酸残基。
抗体的胺 (NH2) 基团大量存在于赖氨酸残基和多肽链的 N 末端,可在多个位点进行标记。由于它们的反应性,它们很容易被修饰,谷氨酸和天冬氨酸侧链上的羧基可用于交联。
碳水化合物部分通常位于高度糖基化的抗体 Fc 区域。该区域的标记是有益的,因为它们远离抗原识别位点,因此干扰的风险降低。此外,如果氧化成醛,抗体的抗原结合亲和力不会受到明显影响。
在含巯基的半胱氨酸上进行标记是另一种选择,因为半胱氨酸的还原会将抗体分成两个单价结构域,而不会破坏抗原结合位点。当半胱氨酸被氧化形成二硫键时,就会形成巯基,然后在抗体的铰链区域进一步还原。
另一个替代标记靶点是酪氨酸残基,酪氨酸残基可以碘化以放射性标记抗体。美国 FDA 已批准 90Y-a 纯 β 发射体和 I131-a 双β和γ发射体作为治疗性放射性核素,用于癌症治疗的偶联抗体,此外还有 111In 和 99mTc(γ 发射体)标记的单克隆抗体用于诊断用途。2
- 伯格,EA和菲什曼,JB(2020)。标记抗体。冷泉港协议, 2020(7), 099242.https://doi.org/10.1101/pdb.top099242
- Gupta,S.,Batra,S.和Jain,M.(2014)。放射性碘和放射性金属抗体标记。分子生物学方法(新泽西州克利夫顿),1141,147。https://doi.org/10.1007/978-1-4939-0363-4_9